关键词：脑力智宝：D-半乳糖；自由基；胆碱酯酶

人类社会年龄结构比例日趋老龄化，老年人因神经系统结构和功能的老化，老年性痴呆的患者日趋增多，资料报道，5%～15%的老年人有不同程度的痴呆症状[1]。益智中药的研究开发，将有助于延缓老年人生理性记忆衰退，改善老年性痴呆。本实验观察了脑力智宝对D-半乳糖致拟衰老模型小鼠的益智作用。
1 材料与方法
1.1 动物 NIH小鼠，9月龄，雄性，60只，由广东省卫生厅实验动物场提供，NIH小鼠，3月龄，雄性，10只，由广州中医药大学实验动物中心提供。
1.2 药品与试剂 脑力智宝由龟甲、枸杞子、石菖蒲、核桃仁、益智仁、当归、远志、红花等组成，水煎浓缩成1g生药/ml；D-半乳糖，上海试剂二厂产品，批号970722；甲磺酸双氢麦角毒碱片（Hydergine），天津华津制药厂产品，批号981196；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、胆碱酯酶（AChE）、总蛋白试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。
1.3 仪器 直径为30cm的圆形有机玻璃回避反应箱，箱底铺有铜栅，可以连接刺激电流，电压30V，箱内一角设一直径和高均为5cm的绝缘橡皮塞为安全区；722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。
1.4 分组给药 将9月龄小鼠按体重随机分为6组，即初老年组，D-半乳糖拟衰老模型组，Hydergine组，脑力智宝低、中、高剂量组；3月龄小鼠作为青年组。模型组和治疗组小鼠每天腹腔注射5%D-半乳糖0.5ml连续6周[2]；青年组、初老年组腹腔注射等体积生理盐水。同时，Hydergine组给予Hydergine 0.6mg．kg-1，脑力智宝低、中、高剂量组分别给予脑力智宝2、4、8g/kg-1，青年组、初老年组、模型组分别给予等体积的生理盐水。各组动物均按20ml．kg-1灌胃，每日1次。
1.5 学习记忆能力测试 6周后，于给药2h后进行跳台训练，训练开始时，先将小鼠放入圆形回避反应箱内熟悉环境2~3min，轻放于平台上，当动物从跳台上跳下四肢接触铜栅时，即给予30V电压刺激，记录小鼠逃避至平台上的潜伏期，并记录5min内的触电次数（错误次数），以此作为学习功能的评价指标。24h后测试，将小鼠置平台上，记录其第一次跳下受电击的时间（潜伏期）及其3min内的触电次数（错误次数），以此作为记忆功能的评价指标。测试时，若小鼠在平台上超过3min，其潜伏期即以180s计。
1.6 脑、脾、胸腺指数测定 跳台法测试结束后，小鼠称重脱椎处死，迅速取出脑、脾及胸腺称重，分别计算脑、脾及胸腺指数。脑（脾、胸腺）指数=脑（脾、胸腺）重量（mg）/体重（g）
1.7 生化指标检测 脑组织称重后，用预冷的生理盐水制成1：10（W/V）的匀浆，3000rpm离心10min，取上清液，用黄嘌呤氧化酶法[3]测SOD活力，用硫代巴比妥酸法[4]测MDA含量，用DTNB直接法[5]测GSH-Px活力，用碱性羟胺比色法[6]改良测AChE活性，并用Lowry法[7]测脑匀浆中组织蛋白含量。
1.8 统计学处理 实验数据用 X±S表示，组间比较用t检验。
2 结果
2.1脑力智宝对D-半乳糖致拟衰老模型小鼠外观及学习记忆能力的影响 结果显示，与青年组及初老年组相比，D-半乳糖组小7鼠毛发枯黄、无光泽、行动迟缓、自主活动明显降低，各给药组则有明显改善。由表1可知，D-半乳糖模型组小鼠学习记忆能力明显下降，训练时，逃避至平台上的潜伏期延长，测试时，在平台上停留的潜伏期缩短，错误次数增多，与青年组和初老年组比较，差异显著或非常显著；各给药组均能提高模型小鼠的学习记忆能力，与D-半乳糖组比较差异显著或非常显著。
2.2 脑力智宝对D-半乳糖致拟衰老模型小鼠脑、脾及胸腺指数的影响 由表2可知，与青年组及初老年组相比，D-半乳糖组小鼠脑、脾及胸腺指数明显下降，各给药组则有不同程度回升。
2.3 脑力智宝对D-半乳糖致拟衰老模型小鼠脑组织中MDA含量、SOD、GSH-Px、AChE活性的影响 由表3可知，与青年组及初老年组相比，D-半乳糖组小鼠脑组织中MDA含量明显升高，SOD、GSH-Px活力下降；AChE活性明显升高，差异显著或非常显著；各给药组均可降低脑组织中MDA含量，提高SOD及GSH-Px活力，并降低AChE活性，差异显著或非常显著。

3 讨论
D-半乳糖亚急性中毒状态下，体内产生大量超氧阴离子自由基，对组织产生过氧化损害，这种生化和组织结构的改变与自然衰老表现基本吻合，同时实验表明，在D-半乳糖亚急性中毒状态下，动物的学习记忆行为受到明显损害，具有类似衰老的学习记忆障碍特征[8]。
实验结果表明脑力智宝能明显改善D-半乳糖致拟衰老模型小鼠的学习记忆能力，提示脑力智宝可通过增强机体免疫能力，提高抗氧化酶活性，清除自由基，减少过氧化脂质产物，抑制AChE活性，减少ACh分解，提高脑内ACh水平，从而发挥改善学习记忆能力等脑功能的作用。
参考文献：
[1] 周志宽．益智中药的现状和开发[J]．中国中医药信息杂志，1995，2（2）：18
[2] 陈奇．中药药理研究方法学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，1996，937-939
[3] Mizuno Y. Changes in Superoxide Dismutase,Catalase,Glutathione Peroxidase and Glutathione Reductase Activities and Thiobarbituric Acid Reactive Product Levels in Early Stages of Develop ment in Dystrophic Chickens [J]. Exp Neurol.1984,184( 1):58
[4] Ohkawa H. Assay for Lipid Peroxide in Animal Tissue by Thiobarbituric Acid
Reaction [J], Anal Biochem, 1979, 95: 351.
[5] 夏奕明，朱莲珍．血和组织中谷胱甘肽过氧化酶活力的测定方法I.DTNB直接法[J]，
卫生研究，1987，16(4)：29
[6] 李凤珍，孙曼霁．微量羟胺比色法测量胆碱酯酶活性［Ｊ］．军事医学科学院院刊，1988，
10（3）：211
[7] Lowry OH，Rose-brough NJ，Farr AL，et al Protein Measurement with Folin Phenol
Reagent[J].J Biol Chem,1951,193:265
[8] 张熙，张葆樽，杨新平，等. D-半乳糖诱导拟衰老动物模型的记忆行为改变[J].中国
老年学杂志，1996，16（4）：230